在生物实验中,组织染色的过程是至关重要的。其中,Carnoy固定液是一种常用的染色前处理步骤。下面详细介绍其组成及制作方法:
固定液的制备方法如下:
Carnoy固定液由纯酒精60毫升、冰醋酸10毫升和氯仿30毫升(或可用75%酒精代替)混合而成。这种液体在染色过程中起着固定细胞结构的作用,确保染色结果的准确性。
接下来是染色液的配置:
1. 过碘酸酒清夜的配制:需取过碘酸0.4克,加入95%的酒精35毫升。再加入M/5醋酸钠溶液5毫升(由2.72克醋酸钠溶解在100毫升蒸馏水中得到)和10毫升蒸馏水。将所有成分混合后存放在冰箱的棕色瓶中,可保存两周。
2. Schiff氏液的制备:将0.5克碱性品红溶解在100毫升蒸馏水中,不时摇动以确保其充分溶解。冷却至指定温度后,加入特定量的盐酸和偏重硫酸钠,最后在室温下静置至少24小时,然后密封冷藏。
3. Schiff氏酒的配置:取11.5毫升Schiff氏液,加入0.5毫升1N HCI,再加入23毫升纯酒精。
4. 亚硫酸水溶液的配置:需使用1%偏重亚硫酸钠、1N HCI和蒸馏水来溶解树胶。
染色步骤如下详述:
首先对石蜡切片或冷冻切片进行脱蜡处理,直至其变为水状,细胞涂片则直接水洗。随后用蒸馏水冲洗,再过碘酸酒清夜染色10分钟,用自来水冲洗10分钟。接着使用Schiff氏液进行染色,时间为10分钟,染色后冲洗5分钟。之后对细胞核进行染色,使用哈瑞或迈耶苏木精,如核染色过深可使用盐酸酒精进行分化。冲洗5分钟后进行常规的脱水、透明处理,最后封固。
PAS染色是一种显示糖原和其他多糖物质的染色方法。通过氧化细胞内的多糖乙二醇基,使其与Schiff氏液结合产生红色,从而观察到肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌等结构。其具体步骤包括脱蜡、氧化、清洗、染色、反蓝和封固等环节,确保结果的准确性。
在操作过程中需注意苏木素染液的存放、雪夫试剂的使用以及根据室温调整染色时间。为避免溅眼造成伤害,需做好防护措施。PAS染色在临床应用中广泛用于诊断和研究各种疾病,如心肌病变、心血管疾病、糖原累积病、糖尿病、肿瘤等,为临床诊断和治疗提供重要依据。
PAS染色的原理是利用过碘酸将细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,形成红色物质,从而在细胞浆上定位显示出来。这种方法被用来检测组织中的糖类物质,为生物研究和医学诊断提供了有力支持。